1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
猪瘟是猪的一种重要的疾病，曾称为烂肠瘟、猪霍乱等，在欧美一些地区为与非洲猪瘟区分又称古典猪瘟。猪瘟是由黄病毒科瘟病毒属的猪瘟病毒引起的一种以出血和发热为主要特征,呈急性或慢性经过的高度接触性传染病[1]。有鉴于猪瘟对世界养猪业带来的巨大经济损失和危害，同时考虑到猪瘟疫苗对猪瘟防治的不可替代的作用，国内外研究人员投入了不少精力对猪瘟疫苗进行研究。
我国于1955年成功研制了猪瘟兔化弱毒疫苗（即C株）[2]，并于1958年成功研制出了冻干疫苗，以适用于批量生产[3]。目前市场上常见的猪瘟活疫苗有4种，均以C株为基础，即猪瘟细胞活疫苗、猪瘟乳兔脾淋组织活疫苗、猪瘟成兔脾淋组织活疫苗和猪瘟－猪丹毒－猪肺疫三联苗。其中免疫效果较好的是猪瘟细胞活疫苗和猪瘟成兔脾淋组织活疫苗，也是政府采购的专用猪瘟疫苗[4]。
现今市场上常用的猪瘟疫苗是利用耐热保护剂、采用冻干工艺制备而成的。该工艺的特点是干燥在较低温度下进行，适于保持病毒活性及其他生物制剂原来的性状，如蛋白质等，并且制剂中挥发性成分的损失很少，含水量低，利于血清等不耐热成分的长期保存[5]。而在实际生产过程中，物料密度、导热系数、水分等因素都对生产工艺有直接影响，导致冷冻干燥周期过长、工艺不稳定等。另外，预冻时产生的冰晶也会损害病毒活性，影响了疫苗的效价[6]。而另一方面，猪瘟活疫苗运输及保存必需依赖“冷链”系统，传统猪瘟细胞苗需要－15℃保存，一般养猪业生产条件较难达到这一要求；国外采用由蔗糖、明胶、牛血清白蛋白、水解乳蛋白等成分配伍而成的先进复合组方，制备的冻干疫苗 在2~8℃ 下可保存2年[7]，国内这方面技术较薄弱，一般情况下只能在－15℃下保存[8~9]，王栋等发明的耐热冻干保护剂配方和制造耐热冻干活疫苗的技术，可使疫苗有效保存于2~8℃，这让我国猪痘耐热冻干苗技术达到国际水平，但仍未彻底解决猪瘟活疫苗在生产、运输及使用过程中对＂冷链＂系统的依赖这一难题。此外，传统冻干疫苗的耐热保护剂中所含有的明胶、蛋白质、血清等成分均属于外源蛋白，会对免疫动物产生副作用。伟信余（1965）曾报道1例由猪癌冻干苗引起的过敏反应，但当时并未仔细检测由哪种成分引发，而在人医临床上己有多例明胶引起的过敏甚至休克反应的报道[10]。因此疫苗的安全性和有效性并不能得到充分保证。
2. 研究的基本内容和问题
为了克服猪瘟活疫苗常规冻干保护剂存在的冻干周期过长、贮藏温度低、保存期短、不耐热、存在副反应等缺点，试验取用了新型安全高效耐热保护剂配方，通过精心设计的种种实验，选出了最合适的工艺放大路线。
同时通过其在25℃与45℃下的保存情况选出了最适合保存与运输的产品。
次试验对猪瘟耐热疫苗从科研到生产阶段的冻干工艺产业化放大进行了初步的探索。
3. 研究的方法与方案
整个实验经由猪瘟耐热保护剂配方保存期试验猪瘟耐热保护剂配方配制；测定猪瘟耐热保护疫苗的塌陷温度（Tc）和玻璃化转变温度（Tg），并以此设计冻干程序；疫苗的冻干，疫苗37℃加速耐老化试验；采用兔体感染量(RID)法和免疫荧光法检测猪瘟耐热保护疫苗效价，进行动物安全性试验；检测猪瘟耐热保护疫苗在25℃的耐热效果：将冻干后的成品苗置于25℃温箱中，每隔1个月取出测定TCID50计算效价，试验重复3次；检测猪瘟耐热保护疫苗在45℃的耐热效果：将冻干后的成品苗分别置于45℃温箱中，于7天，10天，14天，21天后分别取出测定TCID50计算效价，试验重复3次等过程，具有相当的可行性。
4. 研究创新点
本实验是通过对疫苗玻璃化转变温度（Tg）和塌陷温度（Tc）测定，选择不同的冻干曲线和冻干材质设计出了一个合适的冻干曲线，在实验室中进行了0.2㎡冻干机下疫苗冻干并检测其效价损失，达到了国家疫苗标准，而经过和企业的合作在企业的0.5㎡冻干机下和2㎡冻干机下采用相同的冻干曲线也达到了国家疫苗标准。
经过实验选出了合适的从0.2 ㎡至20 ㎡的工艺放大路线，给冻干苗的生产从实验室的小规模转向工厂中的大规模生产这一路径做出了一点初步的尝试，本次试验对猪瘟耐热疫苗从科研到生产阶段的冻干工艺产业化放大进行了初步的探索。
5. 研究计划与进展
2018年9月，测定猪瘟耐热保护疫苗的塌陷温度（Tc）和玻璃化转变温度（Tg）。并以此设计冻干程序。
2018年10月，猪瘟耐热保护剂配方保存期试验猪瘟耐热保护剂配方配制及猪瘟耐热保护疫苗的配制和冻干，并得到冻干曲线。
2018年10月，在0.2㎡冻干机冻干后进行猪瘟耐热保护疫苗37℃加速耐老化试验，
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