1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
禽类性腺的发育和分化过程大体上与哺乳动物相似,但也有其发育特殊性,其发育取决于胚胎发育早期中胚层分化出来的生殖嵴中皮质部与髓质部的发育程度,最终分化为左右两侧对称的睾丸或右侧退化的卵巢 ADDIN NE.Ref.{5D537D37-3AF9-4AE0-918C-E4AEE5C93083}[1]。原始生殖细胞(primdial germcells, PGCs)是生殖细胞精子和卵子的前体细胞,与胚胎干细胞(Embryo stem cells,ESC)类似,具备高度未分化的全能性及自我更新能力,是个体将遗传和表观遗传信息传递给后代的载体,对后代的正常发育具有深远的影响。家禽PGCs起源于上胚层,最早出现在后肠,具有双潜能性,可分化形成雌性的卵原细胞或雄性的精原细胞 ADDIN NE.Ref.{E251A18B-9AB7-406B-9949-54910ABE3F0F}[2]。
2. 研究的基本内容和问题
研究目标:
旨在探究鸡胚注射维生素C对胚胎发育早期原始生殖细胞甲基化及多能性基因表达的影响,来研究维生素C处理对早期鸡胚PGCs的全基因组甲基化水平、甲基化调控相关基因(TET1、DNMT1、DNMT3a、DNT3b)和多能性调控相关基因(Sox2、PouV)的表达等方面的影响
3. 研究的方法与方案
试验方案及方法:
本试验拟用自动孵化箱孵化种鸡蛋。试验分组为PBS对照组及维生素C注射组。维生素C处理组设置三个不同浓度梯度。
(1)种蛋静置消毒后于孵化第0日进行钝头气室内注射,后置于孵化箱正常孵化,后于不同胚胎发育时期定期取样检测。
4. 研究创新点
(1)鸡胚注射维生素C等多研究于其是否影响早期鸡胚原始生殖细胞基因组表观修饰状况及全能性等影响鲜有报道;
(2)本试验通过探究维生素C注射等对鸡胚原始生殖细胞发育的影响,与家禽生产实际中的性腺发育进程调控、优化遗传育种过程与后代个体品质性能等方面密切相关,故具有较好的研究与应用价值。
5. 研究计划与进展
2019.11-12 文献检索,完善试验方案,学习相关实验技术如鸡胚注射、RT-PCR等
2019.1-2设计浓度梯度实验确定注射浓度,学切片制作,进行第1-2批预实验
2020.3-4 文献检索,总结方法及问题,完善试验方案,确定采样时期等
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