1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
1.课题意义
非致病性大肠杆菌鞭毛佐剂活性的研究是基于目前国内外对鞭毛蛋白作为佐剂的深入了解与研究,对鞭毛表面高变区进行改建。并且针对当前O型口蹄疫疫苗免疫后抗体产生慢、抗体水平低、抗体持续期短的缺点,选用具有良好佐剂活性的鞭毛蛋白为载体,构建嵌合免疫原,对研制粘膜免疫增强型细菌样口蹄疫病毒(FMDV)疫苗株具有重大意义。[1-3]
2.国内外研究概况
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2. 研究的基本内容和问题
1.研究目标
以口蹄疫病毒为检测靶标,通过小鼠接种实验,检测血清中IgG和粪便中IgA滴度,以比较非致病性大肠杆菌鞭毛全长、和截断片段对病原的免疫增强效果。
2.研究内容
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3. 研究的方法与方案
1.研究方法
(1)生物学软件设计多对引物,PCR扩增鞭毛基因片段,克隆到原核表达载体,构建多个重组菌。
(2)低温诱导表达多个重组菌,HIS-TAG树脂纯化重组蛋白,测定浓度,分装,免疫备用。
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4. 研究创新点
本研究为克服致病菌来源的鞭毛可能具有的潜在危险,过度引发炎症反应,导致可能的耐受性以及其它可能的免疫副反应,本研究选用一种优化改造的正常共生菌株的鞭毛,即非致病细菌来源的鞭毛蛋白并且在保证其佐剂活性的前提下降低它的抗原性、免疫原性以及由其引发的炎症反应,以口蹄疫病毒为检测靶标,评价鞭毛的佐剂活性,对病原的免疫增强效果。
5. 研究计划与进展
1.研究计划
前期:掌握实验相关技能,拟定研究课题并充分了解相关内容,初步构建研究思路,进行开题报告的撰写。开始进行引物的设计,构建重组菌。
中期:重组菌蛋白的成功表达并进行测序,测序鉴定成功后进行小鼠免疫,并检测小鼠血清中特异性抗原的滴度。进行中期报告的撰写。
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