1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
附睾是精子成熟和存储的场所,大多数哺乳动物的附睾和睾丸一起悬至与阴囊内,远离体核以保持较低的温度[1]。
研究表明适宜的环境温度对精子的发生时必需的[2]。
近年来由于全球温室效应的加剧,夏季高温极端天气在各地频发,此外畜牧业的集约化建设,更加提高了饲养环境的温度。
2. 研究的基本内容和问题
研究目标: 揭示抗氧化元件Nrf2,SOD GSH等在热应激过程中的作用,确定热应激对附睾组织的损伤情况研究内容:1. 附睾组织学观察2. 附睾精子计数 3. 附睾抗氧化元件的测定拟解决的关键问题: 附睾在保护精子抵抗热应激过长中的抗氧化通路
3. 研究的方法与方案
研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析研究方法:通过热应激处理组与正常组之间各项测定指标的对比得到试验结论技术路线及试验方案: 1.巴马香猪的饲养:选取六月龄体重相近发育健康的雄性小香猪12只预饲45天,随机平均分为两组,试验组每天在12:00-14:00进行2小时42℃热处理,对照组室温饲养,持续8天,结束后即处死小猪,采集双侧睾丸及附睾 2. 附睾组织学观察:分别在附睾头体尾三处取组织样进行石蜡包埋、组织切片和HE染色,严格按照试剂盒说明进行,试剂盒购于南京建成生物科技公司。
染色完毕后在实验中心显微镜下拍照 3.附睾精子计数:将剩下的附睾组织称重,并按照体重:生理盐水=1:4的比例稀释,冷水浴切碎匀浆。
取10mml匀浆液与细胞计数板上在倒置显微下对肉眼观察到的精子行进计数,并最终得到精子总量 4.组化观察抗氧化元件表达部位:对Nrf2、SOD、GSH在附睾组织的表达部位进行定位,严格按照试剂盒说明进行,试剂盒购于南京建成生物科技公司 5.Western Blot定量测定抗氧化元件表达量:定量测定Nrf2、SOD、GSH在附睾组织的表达量,严格按照试剂盒说明进行,试剂盒购于南京建成生物科技公司可行性分析: 目前国内研究人员对小鼠睾丸组织的热应激损伤方面研究方法已经比较完善,附睾组织的试验方案也是在对睾丸的试验方案基础上完成的。
4. 研究创新点
本实验是在对睾丸进行研究的基础上进行的更进一步的分析,有望揭示附睾在热应激过程中对抑制精子凋亡所发挥的作用,并找到缓解热应激引起的附睾损伤途径,为指导生产过程奠定基础。
5. 研究计划与进展
2013年4-5月 实验准备阶段,先熟悉整个实验的流程、实验原理及学习各个仪器的应用 2013年6月 选定试验用猪及猪场确定 2013年8月猪场养猪 2013年9月采集样品 2013年10至2014年5月各项指标测定及文献阅读与论文撰写
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