江苏省部分猪场猪圆环病毒2型、猪圆环病毒3型的PCR检测与感染分析开题报告

 2023-02-17 09:44:35

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

PCV2是猪场必须防控的重要疫病之一,PCV3自2018年以来也逐渐引起养猪业的重视。本研究用PCR方法,对江苏地区部分猪场采集的样品进行PCV2、PCV3的病原学检测,以了解猪群中PCV2、PCV3的感染状况,为猪场疫病防控提供依据。

猪圆环病毒(porcine circovirus,PCV)属于圆环病毒科圆环病毒属,病毒粒子二十面体对称结构,无囊膜,单股负链DNA,基因大小约2000bp,是迄今发现的最小的动物病毒之一。猪圆环病毒分PCV1、PCV2 和 PCV3 三个血清型。1974 年, 猪圆环病毒由Tischer等[1]于猪肾上皮细胞系中被发现,由于不具有致病性,被认为是一种细胞污染物,1982 年,这种细胞污染物被证实是一种病毒粒子,将其命名为猪圆环病毒。1991年,加拿大D Clark[2]从患断奶仔猪多系统衰竭综合征(Post-weaning multisystemic wasting syndrome,PMWS)的猪体内分离到一种有别于PK-15细胞培养污染物的病毒,其能引起猪的相关疾病。1998 年,Meehan等[3]首次将PCV分为PCV1和PCV2;2016年,Plan等[4]从3例由不明原因引起的心脏和多系统炎症的猪组织样品中检测出了一种新型猪圆环病毒,命名为PCV3。PCV1无致病性。由PCV2引起的猪皮炎肾病综合征、肉芽肿性肠炎、断奶仔猪多系统衰竭综合征和母猪繁殖障碍等一系列相关综合侯群称圆环病毒病(Porcine circovirus disease,PCVD)。PCV3的致病性尚未明确。

1、猪圆环病毒1型

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2. 研究的基本内容和问题

通过对江苏省内部分猪场采集的样品进行提取DNA,利用PCR方法对其进行扩增,最后利用琼脂凝胶电泳来检测被检样品中是否含有PCV2及PCV3,并对结果进行分析。

1、提取DNA

利用提取DNA试剂盒,按照操作标准提取DNA,以待备用。

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3. 研究的方法与方案

1、方法

1.1 病毒DNA的提取

将病料加入灭菌生理盐水后反复冻融,10000rpm/min离心5min后取上清液(血清样品不需要离心,粪便样品加入灭菌生理盐水,涡旋后取上清液),用DNA提取试剂盒按照其操作说明书提取病毒DNA,所得DNA可直接用于PCR检测,或于-20℃保存备用。

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4. 研究创新点

PCV3是新发现的病毒,其引起的猪病是一种新发的猪传染病,引起了世界各国的高度重视和密切关注。当前对其研究还不够深入,处于起步阶段,对其致病机理等还不明确,鉴于PCV3 相关疾病具有传播途径多、传播速度快、流行范围广等特点,现阶段主要是开展 PCV3 流行病学调查,以掌握 PCV3 流行动态及对猪群危害,防止疫情的扩散与传播。

5. 研究计划与进展

2018.9.3—2018.10.31:对病料进行DNA提取,进行PCV3的扩增及琼脂凝胶电泳;对结果进行整理,以了解猪群中PCV3的发生情况。

2018.11.1—2018.12.31:对病料进行DNA提取,进行PCV2的扩增及琼脂凝胶电泳;对结果进行整理,以了解猪群中PCV2的发生情况。

2019.1.2—2019.1.11:将之前PCV2和PCV3的实验结果进行统计及分析,为猪场的疫病防控提供重要依据。

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