湖羊卵巢组织中NR5A2基因表达水平与繁殖性能的关系开题报告

 2023-02-12 12:33:52

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

意义:湖羊原产于我国太湖流域,具有高繁殖力、性成熟早、四季发情和生长发育快等优良繁殖性能,是我国稀有的绵羊品种资源。据统计湖羊的平均产活羔数为2.29,产双羔和三羔率分别占41.9%和33.6%,经过选育后其产羔率更可高达337.5%。而绵羊的繁殖是一个遗传力很低的性状,通过传统的育种方法进行改良其遗传进展缓慢。

国内外研究概况:NR5A2即肝受体同系物(liver receptor homolog 1,LRH1)是一种重要的孤儿受体,属于核受体的NR5A亚家族,在胚胎发育、分化、胆固醇代谢和类固醇激素生成等方面具有重要作用。在成年哺乳动物中,NR5A2主要在肝、肠和卵巢等组织中表达,特别是在卵巢组织中高表达。进一步研究发现,在卵巢组织中,NR5A2在颗粒细胞和黄体细胞中特异表达,而在卵泡膜细胞和间质细胞中不表达,说明NR5A2在卵巢颗粒细胞和黄体细胞中发挥重要作用。NR5A2是雌性动物繁殖力的关键调节因子,控制哺乳动物卵泡发育、成熟和排卵。Duggavathi等人在小鼠颗粒细胞内敲除NR5A2基因导致了卵巢雌激素含量降低,黄体化增加,从而导致排卵数降低,降低了产仔数。而在小鼠体内敲除NR5A2基因可以直接导致胚胎的死亡。因此Lrh1基因对于动物繁殖性能的影响是很大的。

应用前景:开展湖羊多胎分子机制的研究,以充分利用其较高的繁殖性能,可以帮助选育高产品种和改良现有的低产品种都。

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2. 研究的基本内容和问题

本研究拟采用PCR扩增和克隆测序技术获得湖羊NR5A2基因编码区全序列和多态位点,利用生物信息学方法分析其序列特征及蛋白结构,并采用荧光定量 PCR技术检测湖羊卵巢组织NR5A2 基因 mRNA表达水平, 以期从分子水平上探讨NR5A2基因mRNA的表达水平与湖羊繁殖力之间的关系,为阐明湖羊多胎的分子机理提供参考和理论依据。

3. 研究的方法与方案

研究方法:

1.实验动物

在江苏省苏州种羊场选择健康无病、体况良好、经产湖羊母羊 16只,肌肉注射0.1 mg 氯前列醇钠进行同期发情处理,第二次自然发情后48~60 h 内将试验羊全部屠宰,取出卵巢,观察排卵点(或黄体数),记录排卵数;采集下丘脑、垂体、卵巢等组织样,立即置于液氮冻藏,-70℃保存,用于提取总RNA。

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4. 研究创新点

对于NR5A2基因的研究,却大多集中在人和鱼类的研究上,湖羊作为太湖流域高繁殖力的代表,对其NR5A2基因的研究目前没未见报道。

5. 研究计划与进展

2013年10月~2013年12月:阅读关于NR5A2基因的文献

2014年1月~2014年3月:提取湖羊组织RNA样品,反转录

2014年3月~2014年4月:合成引物,Real-time 定量 PCR

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