1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
生殖细胞是多细胞生物体内能繁殖后代的细胞的总称,体细胞最终都会死亡,只有生殖细胞有延存至下代的机会,在物种的延续中占有重要地位。从体外现有的干细胞获得全能的生殖细胞,则能很大程度上满足人类研究与治疗的需要。
骨髓间充质干细胞是来源于骨髓的单胚层多能干细胞,因取材容易,能迅速体外培育和增殖,同时具有多向分化潜能,它在体外可以诱导分化为成骨细胞和软骨、脂肪细胞、肌细胞、肝细胞、神经元样细胞、表皮细胞、血管内皮细胞等。唐秋灵等采用刘风华实验的诱导条件诱导人脐带来源的MSC,细胞向精原细胞方向分化并表达精原细胞的分子标记。证实人脐带来源的MSC也具有向精原细胞方向分化的潜能。Park等将人iPS和妊娠头3个月的人胎儿性腺基质细胞共培养,iPS能向原始生殖细胞方向分化,但分化细胞无减数分裂相关基因表达,不能产生配子。骨髓干细胞也具备上述干细胞相似的多分化潜能,所以本实验试图促使山羊骨髓间充质干细胞向生殖细胞分化。
视黄酸(RA)是一种脂溶性的小分子物质,是细胞生长、分化增殖和程序性凋亡的关键调节因子。有研究表明,RA可以诱导小鼠的胚胎干细胞向雄性生殖细胞方向的分化,当诱导的细胞出现向生殖细胞方向分化后stra-8基因开始表达。Stra-8基因从原始生殖细胞形成后期就开始表达,并持续表达到生精细胞减数分裂前期。而基因的表达是生殖细胞开始形成的特异性标志。
2. 研究的基本内容和问题
本试验尝试添加不同浓度的外源因子RA和BMP4 诱导山羊BMSCs发生分化,通过生殖细胞特异表达基因MVH和DAZL的表达水平确定最佳的RA和BMP4的诱导浓度,并用RA,BMP4和RA BMP4三个处理组对BMSCs进行外源因子的诱导,14d后观察山羊BMSCs形态学的变化以及检测生殖细胞相关基因的表达。
内容:
1 优化不同浓度的外源因子RA和BMP4 设计合适的不同浓度的RA和BMP4;
3. 研究的方法与方案
研究方法:荧光PCR
技术路线:见图
实验方案:
4. 研究创新点
同时用RA和BMP4对山羊BMSCs进行处理,检验其向生殖细胞表达。
5. 研究计划与进展
2013年10月20号-11月5号 优化RA和BMP4浓度;
2013年11月25号 用不同浓度RA和BMP4诱导山羊MSCs;
2013年12月1号-12月20号 检测被诱导的MSCs的MVH和DAZL的表达水平;
以上是毕业论文开题报告,课题毕业论文、任务书、外文翻译、程序设计、图纸设计等资料可联系客服协助查找。