1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
锌指蛋白是一类庞大的、包含了多种其他不同的锌指家族的蛋白,具有多样的生物功能。
锌指蛋白对基因调控起重要的作用,可通过与靶分子DNA、RNA、DNA-RNA的序列特异性结合,以及与自身或其他锌指蛋白的结合,在转录和翻译水平上调控基因的表达[1]。
在细胞分裂中,有丝分裂和减数分裂都需要高度精确的染色体分离来确保遗传物质的正确分配[2],,姐妹染色单体连接的提前断裂会引起遗传物质的丢失和重叠,并导致染色体的不稳定性。
2. 研究的基本内容和问题
1.研究目标 通过敲低Zfp207,综合应用分子生物学和细胞生物学学等手段,明确Zfp207在卵母细胞减数分裂过程中对染色体排列和纺锤体组装的调控机制。
2.研究内容 ①探索Zfp207在小鼠卵母细胞中的定位; ②探索Zfp207在小鼠卵母减数分裂过程中对纺锤体组装和染色体排列的影响。
3.待解决的问题 Zfp207在有丝分裂中作为染色体排列的调节蛋白的作用广为人知,但是在减数分裂中的具体功能尚未有定论,认知也较缺乏。
3. 研究的方法与方案
1.小鼠GV期卵母细胞的获得和体外培养将小鼠颈椎脱臼处死,用剪刀和镊子打开腹腔取出两侧卵巢,放入提前在CO2培养箱平衡的M2体外操作液滴中。
用刀片将卵巢剁碎并用M2冲洗后,在显微镜下用口吸管捡取形态、大小正常的 GV 期卵母细胞。
取出的GV期卵母细胞在M2培养液中洗3遍将用M2洗净去除杂质后的卵母细胞转移至平衡好的M16 培养滴中,盖上石蜡油,放入培养箱中培养。
4. 研究创新点
1.目前关于Zfp207的作用机理研究较少; 2.以往研究主要集中在Zfp207在有丝分裂过程中的作用,对其在卵母细胞的减数分裂研究较少。
5. 研究计划与进展
2016年9月-2016年11月:相关文献查阅,试验方法学习摸索,试验条件的准备。
2016.11-2016.12:完成小鼠GV期卵母细胞的获得并进行体外培养。
2017.1-2016.2:Zfp207显微注射及免疫荧光染色。
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