不同尿素添加水平对湖羊瘤胃发酵参数的影响开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1.本课题的意义、国内外研究概况、应用前景等(列出主要参考文献)

1.1研究意义：

反刍动物养殖发展迅速，蛋白质饲料需求量大，反刍动物可以利用尿素产生菌体蛋白，减少蛋白质饲料的使用，降低饲养成本。然而不同尿素添加水平对湖羊瘤胃发酵参数的影响研究报道不多，本试验以湖羊为试验动物，通过在日粮中添加不同尿素水平，探究其对瘤胃发酵参数的影响，以期待为尿素的合理使用，以及饲料配方提供进一步的理论依据。

2. 研究的基本内容和问题

2.研究的目标、内容和拟解决的关键问题

2.1研究目标

本研究以湖羊为试验动物，系统研究日粮不同尿素添加水平对湖羊瘤胃发酵参数的影响，来探寻最适湖羊瘤胃生长的尿素水平，为尿素在湖羊瘤胃的研究提供理论依据，为尿素在实践生产中提供理论帮助。

3. 研究的方法与方案

3.研究方法、技术路线、试验方案及可行性分析

3.1研究方法

本试验通过比较不同尿素添加水平对湖羊瘤胃发酵参数(pH、氨氮、VFA)的影响来探寻最适湖羊肠道生长的尿素水平

3.2技术路线

3.3试验方案

3.3.1主要仪器

GC-14B型气相色谱仪(日本岛津公司)，pH计(Ecoscan pH 5，新加坡)，NanoDrop 2000c分光光度计(美国，Thermo Fisher Scientific)，气相色谱仪(美国，安捷伦7980A)，体重秤(浙江，蓉城体重秤)，

3.3.2试验设计

添加剂：尿素(江苏科伦多食品配料有限公司，中国江苏)。

试验采用单因素多水平试验设计，选取42只23kg左右的2-3月龄公湖羊，按照随机区组设计和同栏大小相近原则，根据体重分为3个组，每个组7个重复，每个重复2只羊。分别饲喂以下三种日粮：基础日粮(对照组UC)，基础日粮添加1 DM尿素(低水平尿素组UL)，基础日粮添加3DM尿素(高水平尿素组UH)所有日粮的能量含量相似，但粗蛋白(CP)含量不同，其配方满足体重25公斤的产肉羊的能量需求，日平均增重(ADG)为200克[24]。对照组UC和低水平尿素组UL日粮的CP含量低于CP要求，而高水平尿素组UH日粮的CP高于产肉羊的CP要求。具体的日粮配方和营养成分表见表1。

试验中若一次性添加干物质含量3的尿素，可能会引起湖羊的氨中毒，甚至死亡。在试验初期可以逐渐升高尿素的添加水平，以使其适应。试验期持续10周，其中第一周为适应期，后9周为正式试验期，最后1周进行屠宰取样。在为期一周的适应期中，所有羔羊都饲喂对照组UC日粮。然后，允许低水平尿素组UL，高水平尿素组UH的羔羊通过四个阶段逐渐过渡到试验期日粮，每个阶段为2天。每天两次在0700和1900 喂两次TMR(全混合日粮)，日粮精粗比为5545(含有玉米粒，豆粕，麦麸，预混料和尿素的浓缩物，以及包括玉米青贮饲料和花生藤的粗饲料)，并且大约有10％的饲料剩余。所有羊圈(4 m×4 m)都在室内，铺有木地板，可以自由采食和饮水。

表1试验日粮组成和营养成分

Table 1 Ingredientchemical composition of the experimental diets

注：基础日粮(对照组UC)，基础日粮添加1DM尿素(低水平尿素组UL)，基础日粮添加3 DM尿素(高水平尿素组UH)

¹每千克提供：盐150 g；碳酸氢钠200 g；钙75 g；磷20 g；锌960 mg；铁680 mg；锰600 mg；铜300 mg；维生素A 140000 IU；维生素D3 55000 IU；维生素E 700 IU；烟酸600 mg。

UC, urea supplemented at 0 g/kg dry matter (DM); LU, urea supplemented at 10 g/kg DM; HU, urea supplemented at 30 g/kg DM;

¹Fmulated to provide(per kg of DM) 150 g of salt, 200 g of NaHCO3, 75 g of Ca, 20 g of P,960 mg of Zn , 680 mg of Fe,,600 mg of Mn,300 mg of Cu, 140,000 IU of vitamin A, 55,000 of vitamin D3, 700 IU of vitamin E,600 mg of niacin.

3.3.3样品采集与分析

试验期最后一周每组选取6只湖羊进行屠宰，采瘤胃内容物，用于瘤胃发酵参数(pH、氨氮、VFA)分析。内容物经四层纱布过滤后，将过滤的瘤胃液装入离心管中，所有瘤胃内容物及瘤胃液样品于-20℃保存，供氨氮测定，并测定24h的VFA含量。

pH的测定：内容物经四层纱布过滤后，立即使用pH计(Ecoscan pH 5，新加坡)测定pH值(测定前应用标准液矫正pH计)。

氨氮浓度的测定：发酵液置于离心管中，冻存于-20℃，备测氨氮浓度，测定氨氮前使用流水解冻样品，参照Broderick G描述的方法[25]，使用氯化铵作为标准品，利用比色法测定瘤胃氨氮浓度。

挥发性脂肪酸的测定：取瘤胃内容物经四层纱布过滤后的瘤胃液1 mL于加有0.2 mL偏磷酸巴豆酸混合液的2 mL离心管中，冻存于-20℃，用于挥发性脂肪酸测定，参照申军士等方法[26]，流水解冻后9000 g的离心力条件下离心10 min，取上清液通过0.22 μm针式滤器过滤，过滤后使用乙醚按12比例(上清液：有机溶剂)萃取，萃取后使用气相色谱仪(美国，安捷伦，7890A)测定挥发性脂肪酸；测定条件，进样口温度：220℃，柱箱温度：150℃，检测器温度：250℃，分流比：301。

3.3.4数据统计与分析

用Excel2010对试验结果进行简单数据分析后，用SPSS 20.0进行单因素方差分析，用Duncan法进行多重比较，P0.05为差异显著，P0.01为差异极显著。

4.可行性分析

本研究在理论上是可行的，指导老师长期从事反刍动物饲料与营养的研究，学校实验室具备本试验所需的仪器设备，师兄师姐也可给予帮助，本人具备基本的实验操作能力和文献阅读能力，本试验所采的样品来自浙江湖州太湖湖羊养殖专业合作社，可以满足试验需要。

4. 研究创新点

5.项目特色或创新之处

反刍动物可以利用尿素生产菌体蛋白，从而减少昂贵蛋白质饲料的使用，然而饲料中尿素过多会使反刍动物中毒死亡，因此掌握尿素的添加水平极为重要，且不同尿素添加水平对湖羊瘤胃发酵参数的影响研究较少。

5. 研究计划与进展

6.研究计划及预期进展

6.1研究计划

2019年3月——2019年4月 查阅文献，确立课题，完善试验计划。

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