1. 研究目的与意义
1、RhoGDI-3是作为一种GDI存在,即新的GDP解离抑制剂。是由RhoB和RhoG相互作用形成的。总体来讲,RhoGDI分为三类,大体上为RhoGDI-1、RhoGDI-2、RhoGDI-3,三个亚型各有特色。其中RhoGDI-1有广泛表达的性质,RhoGDI-2有造血特异性,RhoGDI-3的性质并不明显,不过最近的研究资料表明RhoGDI-3具有N端延伸的性质,表现出了比较广泛的特异性。
2、RhoGDI最典型的是防止核苷酸交换和膜结合的能力,而Rho家族中的GTP酶在细胞功能的影响中扮演重要的角色。由三个亚型组成家族RhoGDIα,可以与RhoA和RhoB结合。一直以来RhoGDI具有悠久的进化历史。大量研究数据表明RhoGDI在细胞生长过程中起到明显的调节作用。
3、NLRP3与代谢之间存在着密切的关系,在激活之后变成病理性促进疾病,II型糖尿病属于NLRP3的代谢性疾病之一,其本质是以某种未知的方式抑制了胰岛素的作用方式。饱和脂肪酸和神经酰胺也能激活NLRP3。大量研究数据表明NLRP3在II型糖尿病、肥胖、心血管疾病方面即涉及炎症机制的方面起到至关重要的作用。
2. 研究内容和问题
基本内容:1、NLRP3炎症小体抑制剂处理对PDGF-BB介导的VSMC表型转化的作用;2、NLRP3炎症小体激活剂处理对RhoGDI3敲减引起的VSMC表型转化减少的逆转作用。
研究目标:观察并证实NLRP3炎症小体在PDGF-RhoGDI3信号介导VSMC表型转化中的作用。
解决的难题:RhoGDI3 是否依赖 NLRP3 炎症小体活化参与VSMC表型转化。
3. 设计方案和技术路线
研究背景
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RhoGDI的概念NLRP3所起到的作用VSMC的性质
4. 研究的条件和基础
硬件条件:(1)SW-CJ-IFD型超净工作台 (2)TY-80S脱色摇床(南京新校园生物技术研究所)(3)细胞培养板(美国Costar公司)(4)离心管(沃森公司)(5)Thermo Forma Series II CO2 培养箱(美国)(6)Spring-S15双蒸水仪(美国)(7)数字式超级恒温浴槽(成都仪器厂)(8)低温台式冷冻离心机(Beckman Coulter Microfuge 22R)(9)全自动灭菌锅(TOMY SX-500,日本)(10)日立-70超速离心机(日本)(11)恒温振荡器(苏州市培英实验设备有限公司)(12)电子天平(METTLER,GB303,TOLEDO)(13)OLYPUS倒置荧光显微镜(日本)(14)ST-70制冰机(美国圣斯特制冷设备制造有限公司)(15)20mL注射器(江苏华达医疗器械有限公司)(16)盖玻片(CITOGLAS)(17)粘附载玻片(CITOGLAS)(18)Transwell小室(Corning)(19)Mitoquinone mesylate (MCE)(20)CY-09(21)BSA(江苏海门碧云天生物技术研究所,货号P0007)
软件条件:熟练地掌握细胞培养、EdU检测、Transwell检测、划痕法等基本的实验操作和方法,查阅国内外的文献和资料,对实验研究的基本内容、课题研究的现状及发展趋势、研究的意义和价值有深刻的了解。
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