1. 研究目的与意义
抗骨增生胶囊收载于《中国药典》2015年版一部，该制剂主要由熟地黄、骨碎补、酒肉苁蓉、狗脊、女贞子、淫羊藿、鸡血藤等九味中药材组成。具有补肾，活血，止痛的功能， 主治骨性关节炎肝肾不足，淤血阻络症，症见关节肿胀、麻木、疼痛、活动受限，具有补腰肾，强筋骨，活血止痛的作用。本文选取抗骨增生系列产品作为评价对象，一方面是由于中国已经进入老龄化社会，骨质增生等骨病已成为老年病的常发病之一；另一方面目前文献里只有关于其柚皮苷和淫羊藿苷的含量测定，缺少其他主要成分的质量控制。本论文针对其中的松果菊苷，毛蕊花糖苷，以及已存在的柚皮苷和淫羊藿苷这四种成分，采用高效液相色谱法（RP-HPLC），按照改进后的方法进行含量测定，以及针对重现性，精密度，线性关系，稳定性等各方面进行验证。希望能改善其含量测定方法，完善抗骨增生胶囊的质量评价标准，为其进一步的开发利用提供参考。
2. 文献综述
HPLC法同时测定抗骨增生胶囊中4种成分的含量
1 中药的发展概况
中药源于我国，是我国传统文化的重要组成部分。所谓中药，即是指在中医理论指导下，用于预防、治疗、诊断疾病并具有康复与保健作用的物质。其具有独特的理论体系和显著的疗效，在几千年的中华民族历史长河中一直扮演着治病救人的重要角色。尤其在中国改革开放以后，我国制药企业的发展模式开始由仿制为主的格局转变为仿制加创新的运作结构，对中药品种的质量安全性和有效性也都提出了更高的要求[1]。中药国际化是必然趋势，而实现中药国际化，中药质量现代化是关键。对于中药制药企业来说，在前人基础上研究和创新现代中药，建立和完善中药质量标准体系，使企业生产的中药品种质量稳定，疗效确切，是保障中药造福全人类的基石。
3. 设计方案和技术路线
1.毛蕊花糖苷，松果菊苷，柚皮苷，淫羊藿苷的含量测定
1.1色谱条件与系统适应性
色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂[Phenomenex Luna C18(2) 100A色谱柱]
流动相：乙腈（A）-水（B）梯度洗脱，洗脱程序见下表
梯度洗脱程序
时间（min） A（%） B（%） |
0.0 90 10 30.0 55 45 |
检测波长：282nm 流速：1.0ml/min
柱温：30℃进样量：10μl
1.2 对照品的制备
精密称取各对照品适量，混合均匀，用甲醇溶解制成每1ml含20ug的溶液，即得。
1.3供试品的制备
取本品适量，混合均匀，取约1g，精密称定，置50ml锥形瓶中，精密加入稀乙醇50ml,称定重量，超声处理（功率250w，频率40kHZ）30分钟，放冷，再称定重量，用稀乙醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，作为供试品溶液。
1.4测定法
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得。
1.5前处理和色谱条件的考察
参考《中国药典》等相关文献，以淫羊藿苷、柚皮苷、松果菊苷盒毛蕊花糖苷为考察指标。利用多因素实验分别考察样品前处理方法。
分别精密称取不同批号的抗骨增生胶囊各1.0g，置具塞瓶中，按下表方法进行考察
抗骨增生胶囊提取方法考察
提取方法 | 淫羊藿苷（mg/g） | 柚皮苷（mg/g） | 松果菊苷（mg/g） | 毛蕊花糖苷（mg/g） |
50%乙醇50ml超声30min | ||||
50%乙醇50ml回流30min | ||||
70%乙醇50ml超声30min | ||||
70%乙醇50ml回流30min | ||||
无水乙醇50ml超声30min | ||||
无水乙醇50ml回流30min | ||||
稀乙醇50ml超声30min | ||||
稀乙醇50ml回流30min |
1.6检测波长考察 取松果菊苷，毛蕊花糖苷，柚皮苷及淫羊藿苷对照品溶液分别在200-700的波长范围进行全波长扫描，确定各个成分在哪个波长有最大吸收。 2.标准曲线的制备 精密量取混合对照品溶液（每1ml含松果菊苷、毛蕊花糖苷、柚皮苷、淫羊藿苷分别为58.76μg、59.92μg、33.20μg、31.36μg）1、2、5、10ml，分别置50ml量瓶中，用稀乙醇稀释至刻度，摇匀，制成系列浓度的混合对照品溶液，取各对照品溶液及对照品储备液进样分析。以进样量（μg）为横坐标（X），以峰面积为纵坐标（Y），进行线性回归 , 绘制标准曲线 ,得回归方程。从而表明峰面积与浓度的线性关系。 3.重复性测定 精密称取同一样品（厂家A，批号160201）1g，制备供试品溶液6份，进样分析，计算平均含量和RSD 4.精密度测定 精密称取同一样品（厂家A，批号160201）1g，制备供试品溶液1份，重复进样6次，测其含量和RSD 5.专属性测定 取混合对照品溶液、供试品溶液、缺熟地黄、肉苁蓉阴性供试品溶液、缺肉苁蓉阴性供试品溶液、缺骨碎补阴性供试品溶液及缺淫羊藿阴性供试品溶液各10μl，进样分析 6.耐用性试验 溶液的稳定性：取同一供试品溶液，室温下放置，分别于0、2、4、8、12、24h在上述色谱条件下进样分析，分别计算柚皮苷，淫羊藿苷，毛蕊花糖苷和松果菊苷各时间点峰面积的RSD， 7.回收率试验 精密称取已知含量的样品（厂家A，批号160201，松果菊苷含量5.20mg/g，毛蕊花糖苷含量0.88mg/g，柚皮苷含量0.53mg/g，淫羊藿苷含量1.74mg/g）九份，每份约1g，分别按照约80%、100%、120%的浓度，加入松果菊苷对照品储备液、毛蕊花糖苷对照品储备液、柚皮苷对照品储备液及淫羊藿苷储备液，每个浓度各3份，加稀乙醇补充溶剂至25份。 照样品含量测定法测定 , 回收率平均值和RSD。 |
4. 工作计划
1．2022.02.05确定选题，收集相关资料 2．2022.02.10文献调研与撰写综述 3．2022.02.25准备好对照药材和抗骨增生胶囊样品，确定好方案 4．2022.03.01撰写开题报告与开题 5．2022.03.12开始实验并深入研究 6．2022.04.15形成论文初稿 7．2022.04.30论文修改，定稿，打印 8．2022.05.05提交论文并准备PPT，答辩 9．2022.06.12参加答辩 |
5. 难点与创新点
1.目前针对抗骨增生胶囊这一剂型的质量标准仅有淫羊藿苷的含量测定，该论文除了对淫羊藿苷成分的测定外还针对毛蕊花糖苷，柚皮苷和松果菊苷进行了测定和验证。加强了对抗骨增生胶囊中主要成分的质量控制。 2.以前的文献上关于含量测定所采用供试品制备的方法是加入稀乙醇后超声1h，但是该论文采用加稀乙醇后超声45分钟 ，并且色谱上改用乙腈和水进行梯度洗脱。用时少，且减少了了用四氢呋喃产生的毒性，且不用配制，可直接取得，更加方便，简单。 3.采用一种处理方法可以同时测定4种成分的含量。方法简便、适用性强，为该品种的质量标准提升提供了参考依据。 |
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