1. 研究目的与意义
研究内容:血管内皮细胞损伤是动脉粥样硬化(AS)发生发展的初始因素,而同型半胱氨酸(Hcy)可通过多种机制损伤血管内皮细胞。
在前期的研究中证实六味地黄方可以通过上调雌激素受体α(ERα)的表达,从而保护血管内皮细胞,并且检测到甲基转移酶1(DNMT1)的表达上升,六味地黄方干预后DNMT1表达下降。
因此推测六味地黄方是通过调节DNMT1的表达来上调ERα起到保护血管内皮细胞的作用。
2. 文献综述
动脉粥样硬化发生机理与防治方法初探摘 要:动脉粥样硬化是一种由多因素引起的慢性炎症性疾病。
血管内皮细胞是血管壁与血液之间的分界细胞,与动脉粥样硬化发生具有密切关系。
同型半胱氨酸被发现是动脉粥样硬化的独立危险因子。
3. 设计方案和技术路线
研究方案:1 HUVECs的培养将HUVECs接种于25 cm2培养瓶,培养液为含10% 胎牛血清的高糖DMEM培养液,置于37℃、5% CO2、饱和湿度培养箱培养,待细胞贴壁生长为单层时,用0.25%胰蛋白酶(含0.02% EDTA)消化细胞,均匀接种于96孔板或者传代接种于培养瓶,每2-3天更换一次培养液。
2 甲基化细胞模型的复制及检测采用Hcy复制人脐静脉内皮细胞甲基化模型。
3 细胞质粒转染方法当细胞培养生长至80%的时候进行转染,用胰酶消化以2105个细胞/孔接种于六孔细胞培养板中,以不含抗生素的含10%胎牛血清的正常培养基培养细胞。
4. 工作计划
2022年3月-4月 培养人脐静脉内皮细胞株,成功转染DNMT1过表达质粒DNMT1过表达质粒;确证DNMT1的表达,研究丹皮酚对HUVECs凋亡的影响。
2022年4月-5月 观察丹皮酚对内皮细胞的保护作用及其对ERα表达的影响。
2022年5月-6月 总结材料,撰写论文。
5. 难点与创新点
成功建立DNMT1过表达内皮细胞模型
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