1. 研究目的与意义
一、内容：
不同青娥丸中主要活性成分体外吸收特性研究
采用Caco-2细胞模型研究青娥丸中主要活性成分的摄取机制。在不同因素影响下（浓度、时间、pH值、温度、抑制剂、盐度）考察对不同青娥丸提取物的摄取特点，研究松脂醇二葡萄糖苷、京尼平苷酸、补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂二氢黄酮、异补骨脂二氢黄酮的摄取机制，分析NaCl是否影响Caco-2细胞对青娥丸中主要活性成分的摄取。
2. 文献综述
复方青娥丸的研究进展
摘 要：青娥丸首载于宋代，其应用历史悠久，对腰酸无力，不能久立远行、腰痛、脚气、头痛、慢性腰肌劳损及腰椎退行性病变、骨质增生等症有确切疗效。本文从处方组成，炮制，质量标准及药理作用进行综述。
关键词：青娥丸；炮制；化学成分；质量标准；药理作用
3. 设计方案和技术路线
不同青娥丸中主要活性成分体外吸收特性研究
参照文献[兰燕宇，等. 杜仲提取物中4种主要成分在Caco-2细胞的摄取特性研究.中国药理学通报，2014，30（9）：1306-1311]中的方法进行Caco-2细胞培养，将培养14 d 的Caco-2细胞用37℃、pH7. 4 的HBSS 缓冲溶液在培养箱中培养20 min后，吸去缓冲溶液。用HBSS 缓冲溶液轻轻冲洗两遍，洗去细胞单分子层表面的杂质。加入含药的HBSS溶液2 mL，置37℃的培养箱中，分别考察不同影响因素对不同青娥丸提取物细胞摄取的影响。按摄取时间取出后，加入4℃的HBSS快速清洗3 遍细胞单分子层，加入0.1% Triton X-100（pH 7. 4 的HBSS 溶液配制）细胞裂解液500 μL，反复冻融裂解细胞，取出细胞超声10 min，得细胞悬液。取300 μL细胞悬液，加入10 μL内标，300 μL甲醇沉淀蛋白，涡旋混合1 min，15000 r/min离心5 min，取上清2 μL进样分析，测定松脂醇二葡萄糖苷等6种成分的浓度；另取10 μL细胞悬液以考马斯亮蓝法测定蛋白含量。摄取量以mg(药物) /g(蛋白)表示。
采用UPLC-MS-MS技术建立青娥丸中主要活性成分松脂醇二葡萄糖苷、京尼平苷酸，补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂二氢黄酮和异补骨脂二氢黄酮含量测定方法，并进行方法学考察。在不同因素对（浓度、时间、pH值、温度、抑制剂、盐度）Caco-2细胞摄取的影响。
4. 工作计划
第一阶段：2017年2月-3月文献综述，思路形成，实验方案制定；
第二阶段：2017年3月-4月初步试验、实验条件选择；
第三阶段：2017年4月-5月中旬进行实验研究；
5. 难点与创新点
目前中药炮制研究存在突出的问题是：基础性研究薄弱，大多数中药的炮制原理不清；炮制研究缺乏中医药理论的指导，基础研究成果不能应用于临床。针对目前存在的主要问题，课题组选取青娥丸为研究对象。通过研究杜仲、补骨脂盐炙过程对青娥丸药效成分体外吸收行为的影响，阐明青娥丸中杜仲和补骨脂的盐炙机理。开辟中药炮制机理研究的新思路，形成对中药复方炮制研究的示范。
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