1. 研究目的与意义
一、研究内容：
以CCl4致大鼠肝纤维化模型探究药物诱导的活化型HSC衰老的清除是否与NK细胞相关。
1、免疫荧光三重染色观察肝组织中NK细胞标志物NKp46与细胞衰老标志物Hmga1及HSC活化型标志物α-SMA的表达。
2. 文献综述
NK细胞在肝纤维化中的研究进展
蔡丹凤
南京中医药大学药学院药理学教研室，江苏 南京 210046
3. 设计方案和技术路线
1、体内实验：CCl4致大鼠肝纤维化模型的建立按文献方法进行（Reyes-Gordillo K, et al. Fundam Clin Pharmacol, 2008, 22(4): 417-427.）。CCl4造模实验分组与给药：SD大鼠随机分为3组：正常组、模型组、Curcumin（200mg/kg）剂量组。造模开始后第31天开始给药。正常组和模型组给予相同体积生理盐水。
（1）免疫荧光染色检测肝组织中NK细胞标志物NKp46与细胞衰老标志物Hmga1及HSC活化标志物α-SMA的表达。（2）将每组大鼠的原代HSC提取出来，体外培养0-2代，Real-timePCR和Westernblot检测NK细胞受体相关配体MICA、ULBP2、PVR的mRNA及蛋白水平。Western blot、RNA分离和Real-time PCR等按申请者发表文献进行（Zheng S, et al. Biochem J. 2004, 384(Pt 1): 149-157.）。
4. 工作计划
2022.02.16 -2022.04.16 免疫荧光染色检测大鼠中NK细胞与衰老的活化型HSC活化标志物α-SM的表达；
2022.04.17 -2022.06.17 Real-timePCR和Westernblot检测原代HSC表面NK细胞受体相关配体的表达。
5. 难点与创新点
本课题是在实验室研究发现姜黄素可诱导活化型HSC衰老的前提下，首次探究NK细胞对药物作用下HSC衰老的清除作用。如果获得证实，将可能突破目前对抗肝纤维化研究多聚焦于抑制HSC活化和增殖以及促进其凋亡在清除活化型HSC中的作用机理的认识，且有望寻找到一些新的途径来设计和实施方案，针对调控活化型HSC衰老防治肝纤维化疾病提供科学依据和指导，更有力地显示出Curcumin在抗肝纤维化作用中的理论意义和应用价值。
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